HPLC检测头发中止咳水化学物质磷酸可待因

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所属分类:头发测毒知识
摘要

HPLC是高效液相色谱法的简称,也是检测毒品、药物,乃至目前流行的毛发检测吸毒的主要检测手段。可待因为止咳水中的物质,尿液检测难以区分是吸毒还是服用止咳水,而HPLC能准确区分。

HPLC检测头发中止咳水化学物质磷酸可待因

磷酸可待因化学名为17-甲基-3-甲氧基-4,5α-环氧-7,8-二去氢吗啡喃-6α-醇磷酸盐半水合物,是可待因临床上的常用磷酸盐。可待因是阿片受体激动剂,作用于中枢神经系统,对延髓的咳嗽中枢有选择性地抑制的作用,且镇咳作用强而迅速。可待因也有镇痛作用,其镇痛作用约为吗啡的1/12-1/7,但强于一般解热镇痛药。可待因能抑制支气管腺体的分泌,可使痰液粘稠,难以咳出,故不宜用于多痰粘稠的患者。临床上可待因常用于治疗感冒、发热过高、头痛、肌肉痛,但长期用药会引起依赖性。

除吗啡外,可待因是鸦片中含量最高的生物碱,虽然可以从天然产物中提取,但现代制药行业主要采用半合成方式。为确保本品的安全性,必须对药物在生产、储存及运输等环节中产生的有关物质进行监控,建立相应的控制方法。本研究采用HPLC对磷酸可待因杂质及强降解产物进行研究,建立了一种可同时检测本品中11个有关物质的检测方法,根据ICH指导原则对方法进行了验证。通过采用加校正因子的主成分自身对照法计算杂质含量,能有效评价药物的质量,为制剂的质量控制提供参考。

HPLC检测头发中止咳水化学物质磷酸可待因

含有可待因的止咳水

根据杂质来源可将磷酸可待因的有关物质分为3类:原料引入:杂质B(吗啡)、G(蒂巴茵);工艺副产物:杂质A(主要是由原料吗啡6位羟基同时甲基化生成的甲基可待因);杂质C(两分子可待因聚合生成的可待因二聚体);杂质D(一分子吗啡与一分子可待因聚合形成吗啡可待因二聚体);杂质F(14-羟基可待因)和杂质K(α-codeimethine);降解杂质:杂质E(10-羟基可待因)、杂质H(可待因氮氧化物)、杂质I(去甲可待因)、杂质J(可待因酮)。

磷酸可待因作为一个具有悠久历史的止咳与镇痛药,被EP、USP、中国药典等多国药典收录,并设立了有关物质的质量标准。其中中国药典有关物质仅控制了杂质B,EP中报道了杂质A、B、C、D、E、F、G,而USP中主要研究了杂质A、E、H、I、J,各国药典对磷酸可待因的质量研究部分并没有一个全面的杂质谱研究。笔者根据药典报道及相关文献介绍总结了较全面的杂质谱及最严格的限度标准,并在此基础上开发了用于检测杂质含量的色谱方法并做了方法学验证,对原料药的质量有一个更加全面的研究。

ThermoU3000高效液相色谱仪(包括四元梯度泵,自动进样器,柱温箱,二极管阵列检测器,变色龙色谱工作站);CPA-225D分析天平;PB-10pH计。

乙腈(色谱级,霍尼韦尔);甲醇(色谱级,霍尼韦尔);庚烷磺酸钠(色谱级,Fluca);磷酸二氢钾(分析纯)、磷酸(分析纯)、磷酸可待因样品;蒸馏水(屈臣氏);杂质A(纯度:99.1%);杂质B(纯度:97.3%);杂质C(纯度:98.7%);杂质D(纯度:97.6%);杂质E(纯度:96.8%);杂质F(纯度:95.8%);杂质G(纯度:99.0%);杂质H(纯度:99.5%);杂质I(纯度98.6%);杂质J(纯度:96.5%);杂质K(纯度:95.0%)。杂质B和G。

采用以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂的色谱柱,以缓冲溶液(0.2%磷酸二氢钾1%庚烷磺酸钠的水溶液,磷酸调pH至3.2±0.2)-甲醇(7:3)为流动相A;以流动相A-乙腈(6:4)作为流动相B,采用梯度洗脱:0-20分钟,100%A;40-45分钟,50%A;53分钟,25%A;59分钟,0%A;59.5-66分钟,100%A。流速为1.0mL每分钟-1,检测波长为245nm,柱温为40摄氏度。

具体检测过程过于专业,故省略。

HPLC检测头发中止咳水化学物质磷酸可待因

检测波长的选择

采用二极管阵列检测器对可待因及各杂质进行全波长扫描,从各对照品溶液的DAD图谱结果可知,可待因及其有关物质基本在210nm附近有最大吸收,综合各国药典方法及考虑到低波长处较强的背景干扰,因此选择EP药典方法245nm作为可待因有关物质的检测波长。

色谱条件的优化

分别尝试了EP8.0、USP41、中国药典2015年版中的方法进行可待因与杂质分离度考察,其中EP和中国药典的方法中多种杂质间的分离度不符合要求,USP方法中杂质K和G有重合,所以选择在USP方法的基础上对流动相、洗脱梯度及色谱柱有一个筛选。分别选用了ThermoSyncronisC18(4.6mm×250mm,5um)、FortisXiC18(4.6mm×250mm,5um),在2种色谱柱上各杂质峰形都较好,基线平稳,最终选用ThermoSyncronisC18色谱柱;缓冲盐参照药典磷酸盐和庚烷磺酸钠离子对试剂,通过调节盐的浓度及梯度洗脱,最终确定用0.2%的磷酸二氢钾和1%的庚烷磺酸钠,磷酸调节pH3.2,进行梯度洗脱,主峰与各杂质间分离度良好,检测灵敏度较高,能较好地满足样品有关物质检测的要求。

杂质限度的确定

本品有紫外吸收,能用HPLC考察产品中的有机杂质。各杂质限度标准参考3版药典中最严格的执行:杂质A在EP和USP中限度均为1.0%,本研究根据工艺监控结果,杂质A限度定为0.5%,样品检测符合要求;杂质B参照中国药典限度为0.1%;杂质C和D参照EP限度为0.2%;杂质E参照USP限度为0.15%;杂质H、I、J参照USP限度为0.15%;杂质F、G和K参考ICHQ3A和药典一般要求,设定限度为0.1%。

有关物质测定方法的选择

采用加校正因子的主成分自身对照法计算,可以解决各成分间由于所选波长等条件造成的响应问题,能更准确地控制药品的质量。

本实验建立了一种有效检测磷酸可待因原料药中有关物质的HPLC,并对方法的有效性和检出能力进行了评价,该方法可以检出可待因原料药中目前已知的所有杂质,并能得到有效分离,验证结果表明该方法专属性强,灵敏度高,可以用于磷酸可待因原料药的质量检测,为本品的质量控制提供了方法,也为制剂的研究提供参考依据。